Cyagra 3

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Food and Drug Administration EE. UU. Capítulo V: Riesgos de Salud Animal A. Posibles peligros y riesgos para los animales implicadas en la clonación Este análisis identifica los peligros y riesgos que caracteriza a los animales que participan en la transferencia de células somáticas nuclear (SCNT) en el contexto de otras técnicas de reproducción asistida (artes) en uso en la práctica agrícola corriente de Estados Unidos. A pesar de los riesgos se han identificado en la literatura, una evaluación sistemática de los riesgos potenciales es difícil, debido a la relativa novedad de la tecnología, y la variabilidad en los resultados entre laboratorios y especies clonadas. En esta sección se revisa la información a disposición del público y aplica los conocimientos actuales de la biología animal y las prácticas agrícolas para emitir esa información en un contexto de riesgo. Además de los peligros que caracterizan, este capítulo se identifican los vacíos de información que cuando se llena puede proporcionar una comprensión más completa de los riesgos para los animales asociados a la tecnología SCNT. No se pretende que sea una visión general de todas las técnicas utilizadas para producir clones, ni revisar los estudios que tratan de optimizar las primeras etapas de la producción clon embrión. Más bien, este análisis se centra en esos estudios relevantes para el objetivo general de esta evaluación de riesgos, a saber, la identificación de los riesgos biológicos que la clonación supone para la salud animal. Debido a la diversidad de enfoques en los estudios revisados ​​por pares, CVM ha confiado en diversas artes incluyendo una versión anterior de la llamada transferencia nuclear de blastómeros (BNT) para el contexto. las estadísticas agrícolas actuales también se utilizan para ofrecer a los lectores un marco de referencia para estas tecnologías (ver Apéndice B). Los resultados para los diferentes artes se encuentran en el Apéndice C. informes revisados ​​por pares de resultados primarios fueron utilizados como referencia para la SCNT, mientras que algunas revisiones recientes de la inseminación artificial (IA), la transferencia de embriones (TE), y en los embriones producidos in vitro (PIV), así como los informes de datos primarios, fueron empleados como referencias para las artes mayores. La mayoría de los estudios sobre SCNT y otras artes que son de utilidad para la identificación y evaluación de riesgo para los animales, y que constituyen el objeto de esta evaluación de riesgos son en rumiantes. 33 estudios de ganado son los más abundantes, seguidos por los ovinos, porcinos (una especie no rumiantes) y cabras. informes de investigación revisados ​​por pares sobre estas cuatro especies, con datos adicionales de estudios en ratones, principalmente se han utilizado como base para esta evaluación. Además, CVM evaluó los registros veterinarios, química sanguínea y hematología clínica y análisis de orina proporcionada por dos empresas privadas: (1) Cyagra, Inc. proporcionó datos sobre los 134 clones de ganado individuales que van desde el nacimiento hasta aproximadamente un año y medio de edad (Apéndice E ); y (2) ViaGen, Inc. proporcionó datos sobre 11 clones de cerdos y 402 progenie de clones de cerdos hasta la edad de masacre (Apéndice F). datos no publicados adicionales fueron proporcionados por varias fuentes, en forma de registros veterinarios, química sanguínea y hematología, y el rendimiento reproductivo en pequeños grupos de bovinos y porcinos clones (Apéndice G). Publicaciones de revistas revisadas por pares se realizaron búsquedas de información relacionada con la salud de madres de alquiler, los clones de animales, y la progenie de clones. Siempre que sea posible, los datos sobre los comparadores contemporáneos se han utilizado para proporcionar tasas de referencia a efectos de comparación. Donde las comparaciones no se hicieron dentro de un estudio, la literatura histórica y otras bases de datos disponibles (por ejemplo, USDA Servicio Nacional de Estadísticas Agrícolas (NASS 34) o el Servicio de Vigilancia Nacional de Salud Animal (NAHMS 35)) se realizaron búsquedas de información comparativa aplicable. Por ejemplo, la Tabla V-1 (los índices de supervivencia de nacido vivo de la especie bovina clones y comparadores) presenta datos sobre las tasas de supervivencia de los clones y comparadores, extraídos de ambos comparadores contemporáneas y conjuntos de datos históricos. Las descripciones de cómo otros datos fueron analizados se describen en el Apéndice E (Cyagra de datos), Apéndice F (ViaGen de datos), y en el Apéndice H (Integral de examen veterinario y su interpretación). B. Los Sistemas Biológicos Críticos aproximación al análisis del clon Animal Health: bovinos, cerdos, ovejas y cabras Para proporcionar una evaluación de riesgos para la salud animal que fue lo más completa posible, la CBSA se aplicó a los cinco nodos de desarrollo en múltiples niveles de observación y análisis. Además de las anomalías macroscópicas observadas en las hembras portadoras y clones de sí mismos, la información de este capítulo se incluyen las pruebas disponibles para indicar si existen peligros sutiles que podrían afectar a la salud de los clones. Para los fines de esta evaluación de riesgos, peligros sutiles pueden ser considerados como anomalías fisiológicas que pueden estar presentes en los animales de apariencia normal, pero no son evidentes, ya que su identificación requiere análisis de los parámetros fisiológicos en sangre y tejidos (por ejemplo, la química clínica, las mediciones hematológicas, los niveles de hormonas). 1. El embarazo y el parto (Nodo de Desarrollo 1) El embarazo es un momento notable en el desarrollo de los mamíferos. Una secuencia cuidadosamente orquestada y comprendido de forma incompleta de los cambios tanto en la mujer embarazada y el desarrollo del embrión / feto debe ocurrir para producir un resultado exitoso: un recién nacido sano y madre. A pesar de esta complejidad, la mayoría de los embarazos en el ganado doméstico proceden normalmente y dan lugar a una descendencia sana. Las críticas a punto de clonación para la RS Lee et al. 2004). La pérdida debida a defectos en el embrión o el fracaso del implante en el útero de la madre de alquiler no representa un peligro para la madre en esta etapa temprana. Por el contrario, la hembra simplemente reabsorbe todos los tejidos embrionarios y vuelve al ciclismo (Manual Merck Veterinario Online 2005 36). Mediano y abortos espontáneos tardíos pueden ser peligrosos para los sustitutos si no son capaces de expulsar el feto y las membranas asociadas, posiblemente resultando en la metritis (infección del útero), adherencias de membranas fetales (en la que la placenta no se expulsa), o una momificado (, desecada muerta) feto. Otras complicaciones pueden ocurrir durante el embarazo y el parto que pueden suponer un riesgo tanto para la mujer embarazada y el feto. Nodo del Desarrollo 1 se examinan las causas y la frecuencia de las complicaciones del embarazo y los riesgos relativos tanto a la mujer como para el feto, el uso de otras artes para la comparación cuando se dispone de esos datos. Es importante tener en cuenta que los factores externos no relacionados con el método de cría, como la gestión de los animales y el medio ambiente que pueden influir en los resultados del embarazo. En la evaluación de cualquier arte, incluyendo la clonación, el impacto potencial de estas influencias externas se debe considerar antes de asignar la causa de la pérdida del embarazo de la propia tecnología. Por ejemplo, el estrés es un factor de riesgo importante en la pérdida de un embarazo, especialmente en la fase de preimplantación (antes de que el embrión se adhiere a las paredes del útero). La enfermedad, la desnutrición y las condiciones ambientales severas (temperatura ambiente, por ejemplo) son de alto estrés que interfieren con la fertilidad de los animales y la supervivencia embrionaria (Lucy 2001, Merck Veterinary Manual Online 2005). En estos casos, el riesgo para el embarazo está directamente relacionada con los factores de estrés, no la tecnología utilizada, y debe ser mitigado con el fin de reanudar la reproducción normal. Otro factor a considerar es la metodología utilizada en el proceso de SCNT. Una revisión de la literatura sugiere limitar la manipulación in vitro del embrión o el cambio de las condiciones de cultivo para parecerse más a las condiciones oviducto / útero puede mejorar las posibilidades de resultados de embarazo exitoso. Muchas de las anomalías detectadas en el ganado y los embarazos ovejas no se han observado en cabras o cerdos con clones TNCS. De los informes revisados ​​para esta evaluación, los embriones de cabra sólo fueron cultivadas a través de la fase primera o segunda división (menos de un día en la cultura) antes de la transferencia a los destinatarios (Keefer et al., 2002), en comparación con las ovejas y el ganado, cuyos embriones fueron cultiva generalmente a la etapa de blastocisto (siete a ocho días de cultivo) antes de la transferencia. Walker et al. (2002) reportaron el éxito después de sólo una breve cultivo in vitro de embriones porcinos (1-3 horas después de la activación) antes de transferir a los destinatarios. Onishi et al. (2000) también reportaron el nacimiento exitoso de cerdos SCNT después del cultivo de células de la etapa 2 a 8 (uno o dos días de cultivo), mientras que ninguno de los embriones cultivados hasta la etapa de blastocisto desarrolló a término. Por el contrario, ViaGen, Inc. ha indicado que han tenido un mayor éxito recientemente la transferencia de blastocistos clon porcina (5 días en cultivo in vitro) en hembras receptoras (CVM Memorando II). Lagutina et al. (2006) reportaron el nacimiento de los cerdos después del cultivo de los embriones de cerdos durante seis días en el fluido del oviducto sintético (SOF) suplementado con aminoácidos, en lugar de la suplementación con suero. Las anomalías en el ganado y las ovejas clonadas pueden deberse a una reprogramación incompleta del núcleo donante. Como se ha señalado en el capítulo IV, la reprogramación epigenética ocurre en diferentes momentos en los embriones de diferentes especies, posiblemente en relación con la longitud de gestación. A pesar de que la observación, es interesante observar que a pesar de cabras y ovejas tienen la misma duración de la gestación (unos cinco meses), los resultados anormales de embarazo son frecuentemente reportados con ovejas SCNT, mientras que las cabras SCNT han tenido relativamente pocos problemas reportados (Wells et al. 1998a ; Young et al 1998;. Baguisi et al 1999;. Reggio et al 2001;. Keefer et al 2002;.. Ptak et al 2002). Es importante tener en cuenta que la remodelación epigenética se ha estudiado principalmente en ratones, cerdos y ganado, y se sabe que muy poco acerca de la oportunidad y alcance de la reprogramación de los pequeños rumiantes. La biología de desprendimiento de la placenta también puede dar cuenta de las diferencias entre los resultados del embarazo en las especies evaluadas en esta evaluación de riesgos. En contraste a los rumiantes con un tipo de placenta donde se produce unión fetal sobre toda la superficie de la placenta y revestimiento uterino (Hafez y Hafez 2000). Esta diferencia morfológica bruta en apego fetal puede influir en los resultados de las preñeces de clones en el rumiante contra la especie porcina. 2. Periodo Perinatal (Nodo 2 del Desarrollo) El período perinatal (desde el inicio del trabajo a través de aproximadamente una semana después del parto) es uno de los momentos más cruciales de la vida de todos los animales jóvenes. Varios estudios (revisados ​​por Moore et al., 2002) señalaron que el 75 por ciento de la mortalidad por todas las causas de los terneros de carne de IA producidos de forma natural y se produjo dentro de los primeros siete días de vida. El proceso de parto y el nacimiento puede ser tan estresante para el recién nacido, ya que es en la presa, sobre todo si surgen complicaciones durante el proceso. El recién nacido debe comenzar la respiración casi inmediatamente después del nacimiento, ya sea de forma espontánea o con la estimulación de la madre o el operador humano. Para los animales rumiantes, como para otros herbívoros, es instintivo para el recién nacido para intentar permanecer dentro de los primeros 5-15 minutos después del nacimiento, y para succionar poco después. Los cerdos son menos maduros al nacer que la mayoría de los animales de granja, y aunque son capaces de caminar y la enfermera casi inmediatamente después de su nacimiento, no son capaces de controlar su temperatura corporal (conocida como termorregulación) durante los primeros 10 a 14 días de vida, y generalmente requieren calor suplementario. En los mamíferos, los recién nacidos tienen poca protección del sistema inmune endógeno de la enfermedad durante las primeras semanas o meses de vida. mamíferos jóvenes son dependientes de anticuerpos de transmisión de sus madres, ya sea a través de la placenta o por el consumo de calostro (la primera de fluido de anticuerpos y rica en nutrientes secretada por las glándulas mamarias después del nacimiento anterior a la producción de leche true). El proceso de proporcionar inmunidad a la descendencia de esta manera se llama transferencia pasiva de inmunidad. En los rumiantes y cerdos, el principal medio de esta transferencia es a través del calostro. En las especies donde esta forma de transferencia predomina, el recién nacido debe consumir el calostro tan pronto como sea posible después del nacimiento para asegurar la absorción intestinal de inmunoglobulinas funcionales, grandes proteínas que contienen anticuerpos (Manual Merck Veterinario Online 2005 38). Dentro de aproximadamente 48 horas después del nacimiento (aunque esto puede variar entre las especies), el intestino neonatal pierde la capacidad de absorber las proteínas grandes, funcionales, (un proceso conocido como) y la oportunidad de este método de transferencia inmune se pierde (Donovan 1992). 3. Menores de nodo del Desarrollo (Nodo de Desarrollo 3) Otro período crítico en la vida de los mamíferos jóvenes es inmediatamente después del destete hasta aproximadamente seis meses de edad. En general, la salud y la supervivencia de cualquier animal joven después del destete depende de las condiciones de manejo. Relativamente poca información se ha publicado en la literatura revisada por expertos en la salud y la supervivencia de los clones animales durante este nodo de desarrollo. los datos como se indicó anteriormente, un productor clon ha suministrados (Cyagra, Inc.), incluidos los registros de salud y medidas de laboratorio que han sido evaluados junto con la literatura publicada; Éstos se pueden encontrar en el Apéndice E. La edad al destete varía según las especies, razas, y gestión de las explotaciones individuales. Los cerdos se encuentran normalmente destetados a los 21 días de edad, pero puede ser destetados a los 10 a 14 días. Ovejas y cabras pueden ser destetados entre 8 y 12 semanas de edad. terneros lecheros suelen recibir el sustituto de leche (después del consumo de calostro es completa) hasta el 28 a 60 días, cuando se destetan a la alimentación sólida. terneros pueden permanecer con sus madres y continuar amamantando durante cuatro meses o más. El destete es un período de estrés para todos los animales en desarrollo. La pérdida de peso es común durante el destete como el joven de los animales deben compensar la pérdida de una fuente principal de nutrición y adaptarse a lo que anteriormente se pueden sólo se han ofrecido como un suplemento. Cambiar la dieta puede inducir diarrea (diarrea), sobre todo si se hace bruscamente. La diarrea es una dolencia común en todos los mamíferos jóvenes, y puede ser grave, lo que resulta en la deshidratación y la muerte si no se trata de una manera oportuna (Manual Merck Veterinary Online 2005 39). Además, entre dos y seis meses de edad en los rumiantes, o tan pronto como 21 días para los cerdos, de origen materno inmunidad desaparece, y el animal joven tiene que depender de su propio sistema inmunológico. En algunos animales, tales como ganado de carne, esto puede ocurrir simultáneamente con el estrés del transporte cuando se venden a los corrales de engorde u operaciones Stocker, lo que resulta en pérdidas relativamente altas. 4. Desarrollo Reproductiva y Function Node (Nodo de Desarrollo 4) Debido a la complejidad del sistema reproductivo, cuidadosa atención se dirigió a los informes de la pubertad y la función reproductiva en los clones con el fin de determinar si la clonación había perturbado este sistema delicadamente equilibrado. Los datos de esta etapa de desarrollo en los clones de animales son escasos, sin embargo. En el ganado convencionales, los factores intrínsecos, nutricionales y ambientales inapropiadas han demostrado negativamente a la reproducción influencia tanto en animales convencionales masculinos y femeninos. Sub y sobre la nutrición puede influir en la edad de la pubertad y, en particular, en el caso de la desnutrición, puede interrumpir el ciclo estral normal. factores de estrés ambientales como el calor o frío extremos también pueden suprimir el ciclo normal y el comportamiento estral en las mujeres y reducir la fertilidad y la libido en los hombres (Lucy 2001). (Manual Merck Veterinario Online 2005) alteraciones en las vías metabólicas, como el hipotiroidismo, trastornos genómicos que se manifiestan como freemartins 40 y 41 hermafroditas, así como anomalías congénitas, como hipospadias 42 también pueden dar lugar a fallos en la reproducción. Existen considerables diferencias entre las especies e incluso entre las razas dentro de una especie de edad de la pubertad. En el ganado, la pubertad está relacionada con el peso corporal, y una novilla alcanzarán su primer estro cuando alcanza aproximadamente el 65 por ciento de su peso corporal adulto. En función de la gestión, a continuación, las vaquillas se suelen iniciar el ciclismo entre los 10 y 13 meses de edad. Las cabras y ovejas maduran a una edad más temprana, con el primer estro ocurre normalmente entre siete y ocho meses. variedades de cabras y ovejas enanas pueden madurar a una edad mucho más joven. cabras enanas nigerianas, tales como los utilizados en el Keefer et al. estudio (2001a), maduran desde los cuatro meses (Pugh 2002). Porcina también la madurez sexual a una edad relativamente joven, y cerdas jóvenes suelen comenzar el ciclismo entre los 6 y 8 meses de edad. Los machos generalmente alcanzan la madurez sexual a edades similares a las hembras de la misma raza y especie. En las hembras de las especies agrícolas, el ciclo estral es típicamente de 21 días de duración, aunque existe cierta variación entre las especies. Por ejemplo, el ciclo estral en ovejas está a sólo 17 días. En el ganado vacuno, tanto los machos como las hembras son fértiles durante todo el año, aunque la fertilidad puede ser disminuida durante la parte del año en regiones con climas cálidos y húmedos. Ovejas y cabras originarias de las zonas templadas son reproductores estacionales, llegando a ser fértil en respuesta a la disminución de la duración del día. Razas de ovejas y cabras que se originaron en los trópicos son menos sensibles a la duración del día, y algunos son fértiles durante todo el año. Porcina, como ganado, son criadores de todo el año. Una gestación vacas es de aproximadamente nueve meses, con algunas razas que tienen un poco más corto y otros que tienen gestaciones ligeramente más largos. Ovejas y cabras tienen gestaciones una duración aproximada de cinco meses, con menos variación entre razas. En los cerdos, la gestación es de aproximadamente cuatro meses. Con la excepción del parto, el período reproductivo se caracteriza como de bajo riesgo para la población general de los animales agrícolas sanos, adecuadamente gestionados. En este punto de los animales), distocia sigue siendo un peligro para las novillas. Distocia es una preocupación menor en los animales que normalmente están sujetas a múltiples joven, como el cerdo, como los fetos individuales en los embarazos múltiples feto suelen ser pequeños en comparación con los nacimientos únicos. 5. pospuberal maduración y envejecimiento (Nodo de Desarrollo 5) La madurez y el envejecimiento en los clones de animales de los alimentos no se han estudiado ampliamente debido al relativamente corto período de tiempo que la clonación se ha practicado. La práctica común entre los animales convencionales mantuvo para pie de cría indica que los machos pueden ser mantenidos a una edad más tardía que en las mujeres, ya que en general siguen siendo fértil para un período más largo. Por lo tanto, los hombres de gran valor continuarían en el rebaño, siempre y cuando todavía se están recogiendo el semen de calidad adecuados. Cuando la fertilidad de las mujeres disminuye, se venden normalmente para la masacre, independientemente de su edad. Esta disminución de la fecundidad se produce generalmente bien antes de que el animal presenta otros signos de envejecimiento o enfermedad relacionada con la edad. a. Longitud del telómero como un indicador de envejecimiento Los estudios han sugerido que los telómeros, las largas cadenas de ADN repetitivo que que controla el envejecimiento (Lanza et al., 2000, Betts et al., 2001). En todas las 43 células eucariotas, los extremos terminales de los cromosomas están limitadas por secuencias cortas y repetitivas de ADN no codificante que se repiten hasta muchos kilobases de longitud, en conjunción con las proteínas de unión específica. Los telómeros desempeñan un papel en la estabilidad de los cromosomas, la protección de ADN de la digestión por exonucleasas (enzimas que atacan a los extremos de los cromosomas), facilitando la fijación de cromosoma extremos a la envoltura nuclear, asegurando una adecuada separación de los cromosomas durante la replicación, y asegurar la replicación completa del ADN que codifica durante las divisiones celulares (Kuhholzer-Cabot y Brem 2002). Aunque el ADN en los cromosomas es generalmente de doble cadena a lo largo de su longitud, el extremo del cromosoma, o la de los telómeros, se diferencia en que consiste en un saliente monocatenario (llamado un filamento de revestimiento) de longitud variable que forma un bucle. ADN polimerasas convencionales (enzimas que replican el ADN) no pueden replicar los extremos 5 'extremos de los cromosomas. En su lugar, estas hebras menos desarrolladas se replican en una serie de fragmentos, en lugar de como una hebra continua. Cada fragmento es incapaz o de un nuevo fraccionamiento. Las células senescentes permanecen viables y metabólicamente activo durante largos períodos de tiempo con la muerte celular mínima (Schaetzlein y Rudolph, 2005). Los telómeros parecen ser más larga que en los núcleos de embriones en etapa temprana, y comenzar a disminución de la longitud de partida en el período embrionario. embriones en fase inicial y las células inmortalizadas en cultivo parecen tener la capacidad de reconstruir los telómeros a través de la acción de una enzima conocida como telomerasa (Betts et al., 2001, Xu y Yang 2001). La telomerasa, la enzima responsable de la replicación de los telómeros y la elongación, es activo durante la embriogénesis, suprimida después del nacimiento en la mayoría de tejidos somáticos, pero permanece activa en las células germinales, células tumorales, y en un subconjunto de células madre / progenitoras (tal como fue revisado por Xu y Yang 2003 , Schaetzlein y Rudolph 2005). La activación de la telomerasa parece ocurrir sobre el momento en que el genoma se activa en el embrión: aproximadamente a la etapa de 2 células en ratones, o la etapa celular 8 a 16 en el ganado (Betts y King 2001). La capacidad de los embriones SCNT para reconstruir los telómeros puede depender de la especie, la fuente del núcleo donante, y las condiciones de cultivo para embriones de estadio temprano (Betts y King 2001, Miyashita et al. 2002). La preocupación por la edad y el potencial genético de la longevidad de los clones animales derivados de SCNT se plantearon por primera vez después de un informe de Shiels y colaboradores (1999), quienes observaron que los telómeros de la vida útil de las células in vitro es de aproximadamente 31-33 pasajes). A los 40 días de gestación, el feto se cosechó y una línea celular de fibroblastos establecido. Estos fibroblastos parecían tener una vida útil prolongada en comparación con las células donantes originales, y se sometió a otro 31-33 pasajes in vitro. Otros estudios sugieren que la reducción de la longitud de los telómeros puede estar más relacionado con las especies animales, el tipo de células utilizadas para derivar la línea de células de donantes, o la duración de tiempo en cultivo (Shiels et al., 1999, Kuhholzer-Cabot y Brem 2002 Miyashita et al ., 2002, Betts et al., 2005). Aunque acortamiento de los telómeros puede haber dado lugar a un fenotipo de envejecimiento prematuro de la telomerasa en ratones knock-out (Blasco et al., 1997, Rudolph et al., 1999), los datos convincentes sobre los clones que tratan el tema del envejecimiento prematuro no están disponibles actualmente. variación de la longitud de los telómeros no se ha observado consistentemente en estudios de clonación o especies. El grupo que produjo s redujo la longitud del telómero no se asoció con cualesquiera otros signos medibles de envejecimiento prematuro. 44 Betts et al. (2001) observó que las ovejas SCNT generada a partir de células embrionarias o fetales cultivadas tenían telómeros más cortos 10 -15 por ciento de los controles de la misma edad. Los estudios en clones de ganado indican que las longitudes de los telómeros difieren entre tejidos dentro de un animal, y que el ADN de algunos tejidos eran más susceptibles de reconstrucción de los telómeros, mientras que el ADN de los núcleos de otros tejidos produjo clones con telómeros sustancialmente más cortos. Por ejemplo, Miyashita et al. (2002) han informado de que a pesar de los clones derivados de células epiteliales de una vaca 13 años de edad, y los clones derivados de las células epiteliales del oviducto de una vaca de seis años de edad, tenían telómeros más cortos que los controles de la misma edad, los clones derivados de las células del músculo de un toro de 12 años de edad, fueron similares a los controles de la misma edad. Del mismo modo, Kato et al. (2000) observó que las longitudes de los telómeros en fibroblastos de oído de un clon de ternero fueron similares a la de la 10 años de edad, toro donante nuclear, pero los telómeros en las células blancas de la sangre del mismo clon eran similares a las de un control de la misma edad. La longitud de los telómeros de clones de cabra derivados de células del donante de fibroblastos fetales eran más cortos que en los de los animales de control emparejados por edad (Betts et al. 2005). Estos autores también observaron que se encuentran progenie de clones de cabras para tener más corta longitud de los telómeros en las biopsias testiculares en comparación con los animales convencionalmente derivados, y las longitudes de los telómeros fueron intermedios a los valores obtenidos por sus padres clon y testículos de control de la misma edad (Betts et al. 2005). Esto sugiere que hay era incompleta alargamiento de los telómeros en las crías de clones, aunque como se mencionó anteriormente es incierto si la longitud del telómero es un predictor de la longevidad. Por el contrario, la longitud de los telómeros de clones de ovejas (Clark et al. 2003) y el ganado derivado de adultos o fetales fibroblastos fueron comparables a los bovinos criados convencionalmente (Tian et al. 2000, Betts et al. 2001, Jiang et al. 2004) o incluso ligeramente mayor cuando está cerca de fibroblastos senescentes bovinos fueron utilizados para la clonación (Lanza et al., 2000). Usando una técnica ligeramente diferente para medir la longitud de los telómeros, Meerdo et al. (2005) no encontró diferencias significativas entre los blastocistos derivados de las líneas celulares de fibroblastos bovinos adultos y en blastocistos de fertilización in vitro-producido, pero los blastocistos clones tenían telómeros más largos que las dos líneas de células de donantes. También observaron la actividad de telomerasa detectable en ocytes y un aumento dramático en la actividad de telomerasa en la etapa de mórula. Un segundo estudio en el ganado vacuno y una en ratones demostró también el alargamiento de los telómeros durante la transición de mórula a blastocisto en embriones clonados (Schaetzlein et al. 2004). el envejecimiento celular en cultivo de tejidos también se refleja por acortamiento de los telómeros, y su inversión durante SCNT fue evidente en un estudio realizado por Clark y sus compañeros de trabajo por la restauración parcial de la longitud de los telómeros después de la transferencia nuclear de células a partir de finales del pasaje (Clark et al., 2003). Este y otros estudios sugieren que los gametos tienen actividad telomerasa suficiente para alargar los telómeros a través del proceso de maduración (Xu y Yang 2000, Betts et al. 2001, Meerdo et al. 2005). Wakayama et al. (2000) evaluaron las sucesivas generaciones de clones de ratón para detectar signos de envejecimiento prematuro y los cambios en la longitud de los telómeros en los cromosomas de los linfocitos de sangre periférica. ratones hembra se volvieron a clonar reiteradamente a seis generaciones (es decir, ratón G1 se deriva de una célula somática, G2 ratón se clonó a partir de una célula de ratón G1, etc., para 6 generaciones) y cuatro generaciones en dos líneas independientes. Los clones de ratones (n = 35) no mostraron signos físicos del envejecimiento cada vez mayor, y se comportaron normalmente relación con los controles emparejados por edad, según las pruebas de la capacidad de aprendizaje, la fuerza y ​​la agilidad. Tampoco hubo evidencia de acortamiento de los telómeros, como se había informado en algunos estudios de clones de ganado. Por el contrario, la longitud del telómero aumentó con la clonación sucesivas, aunque este hallazgo puede ser confundida por contribuciones relacionadas con la edad o por las características de las células del donante (las células del cumulus se utilizan para producir los clones fueron encontrados para expresar la telomerasa, lo que sugiere que estas células pueden tener larga telómeros desde el principio). Llegaron a la conclusión de que y sugirieron la posibilidad de que las diferencias entre los resultados observados en diversas especies pueden deberse a la selección de células de más corta longitud de los telómeros más largos o en los diferentes protocolos SCNT. Clark et al. (2003) observó que las líneas celulares de fibroblastos derivadas de clones de ovejas fetales tenían la misma capacidad para proliferar y la misma tasa de acortamiento de los telómeros como la línea celular donante del que se clonaron los fetos. Esta observación llevó King et al. (2006) a la hipótesis de que la senescencia replicativa estaba bajo control genético, y no provocada por una longitud de los telómeros pre-determinado. Recientemente, Yonai et al. (2005) informaron sobre las características de crecimiento y producción de seis Holstein y Jersey (cuatro clones que se describen en detalle en el capítulo VI). Estos clones se derivan de las células epiteliales del oviducto y tenía telómeros más cortos que los observados en vacas viejas criados convencionalmente (Miyashita et al., 2002). La tasa global de éxito en términos de sobrevivencia de terneros más allá del período perinatal fue de 4,8 por ciento para el grupo de Holstein y 10,8 por ciento para el grupo Jersey. En el momento de la publicación de su artículo de todos estos clones restantes se habían producido dos terneros y fueron inseminadas artificialmente y se habían concebido por tercera vez. Los autores concluyeron que Por lo tanto, aunque ha habido informes de los distintos resultados de la longitud de los telómeros en los clones, en este momento no es posible determinar cuál es el mecanismo exacto por el acortamiento de los telómeros es en los clones, ya que los estudios han demostrado que los clones tienen suficiente actividad de la telomerasa para devolver el más corto telómero longitudes de las células del donante a longitudes apropiadas para un desarrollo normal embriones. Además, aunque algunos estudios indican que los clones tienen más cortas longitudes de los telómeros lo que cabría esperar, otros clones tienen telómero longitudes apropiadas para su edad, y algunos parecen tener telómeros más largos. El estudio más detallado de los clones con telómeros acortados indica que los animales parecen estar sano y funcionar normalmente. Finalmente, en este momento, porque la mayoría de clones no han estado vivo para la vida útil completa de su especie, no es posible predecir si los clones con telómeros acortados exhibirán envejecimiento prematuro. C. Datos sobre la Salud Animal por especies Como se mencionó anteriormente, la mayoría de los datos disponibles sobre la salud de los clones animales y sus madres sustitutas se derivan de los estudios en el ganado. La supervivencia de los clones bovinos nacidos vivos de diversos estudios se resume en la Tabla V-1. Debido a que relativamente pocos estudios incluyeron comparadores contemporáneos, datos históricos de diferentes referencias y bases de datos también se incorporaron en la mesa para proporcionar un contexto. Para obtener información adicional sobre la salud y la supervivencia de las crías obtenidas por otras artes, véase el Apéndice C. Tabla V-1: Tasas de supervivencia de Live-Born bovina clones y comparadores 1 sobrevivientes durante el período juvenil / Nacidos vivos 2 NP = No se presentó; datos no disponibles 3 terneros de carne; 4 novillas lecheras 5 NA = no aplicable 6 nahms. aphis. usda. gov/ 7 Ibíd transgénico estado: Todos = Todos los clones citados en la publicación se derivan de las células del donante transgénicos, algunos = Algunos de los clones citados en la publicación son derivado de las células donantes transgénicas, Ninguno = Ninguno de los clones citados en la publicación se derivaron de células donantes transgénicas. FIV = la fertilización in vitro AI = inseminación artificial ET = transferencia de embriones a. Nodo del Desarrollo 1: El embarazo y el parto La mayoría de los abortos en el servicio natural y los embarazos de IA en el ganado no se diagnostican debido al costo del trabajo de laboratorio y el bajo margen de beneficios, tanto en el sector de la carne y la industria lechera. Los productores y los veterinarios se preocupan cuando la tasa de aborto es superior al 3-5 por ciento en un rebaño. Son muchos los factores causales, tanto infecciosas (por ejemplo, bacterias, protozoos, virus, hongos) y (por ejemplo, la genética, la nutrición, estrés, toxicidad) no infecciosas, se han identificado (Merck Veterinary Manual Online 2005 45). pérdidas fetales más tarde en el embarazo pueden ser más comunes en las cabras y los cerdos en comparación con el ganado (Angleterre et al., 1997, van der Lende y van Rens de 2003, Vonnahme et al., 2002), y no están necesariamente asociados con la enfermedad (Angleterre et al. 1997). Farin et al. (2001) indicó que hasta el 40 por ciento de pérdidas de embarazo en el ganado vacuno se produce entre los días 8 y 18 de la gestación. Un estudio reciente (Silke et al., 2002) indicó que la mayoría de los embarazos se pierden durante el mismo período en el ganado lechero, mientras que un porcentaje menor de los embarazos se pierden entre los días 16 y 42 de embarazo (último período embrionario). La pérdida total del embarazo en moderados a altos ganado lechero rendimiento puede ser tan alta como 40 por ciento (Silke et al. 2002). Las pérdidas en las etapas posteriores del embarazo en el ganado criado por AI se estima que menos del 5 por ciento (Thompson et al., 1998). (2004). (2004). estudiar. (segundo). (2007). Heyman et al. yo. a. iii. segundo. yo. yo. ii. iii. do. yo. Heyman et al. Heyman et al. informe. (2002). estudiar. Wilson et al. ii. iii. re. yo. Heyman et al. (2003). Tian et al. Heyman et al. ii. mi. yo. ii. iii. F. Kasai et al. gramo. a. segundo. yo. Walker et al. do. yo. re. re. mi. F. Martin et al. gramo. a. Powell et al. (1999). segundo. estudiar. do. re. mi. F. gramo. a. segundo. do. re. mi. F. gramo.